一场精心设计而又不为人察觉的选拔在民间悄悄展开了，一番阴差阳错之后，柳员外家的三个女子——从小爱舞刀弄的千金柳笑笑、爱棋如命的小妾十三姨、厨艺精湛的丫环百灵以及因逃婚而女扮男装的冷秋月进入了龙儿的视线。
正当龙儿满心欢喜邀她们进宫共襄大举之际，四个女子却被龙儿的叔叔赵王爷神秘劫走。原来赵王爷和黑泥早有勾结，欲谋反篡权，他慌称太子荒淫无度，邀她们进宫只为纳妾，并称太子身上有七七四十九种怪病，吓得笑笑等仓惶而逃。同时，他又慌报龙儿，称四大高手无意为朝廷效命，故中途逃走。
龙儿决定带亲信“包打听”小石头微服私访找回四大高手。而在赵王府，黑泥因不满赵王爷放走四女，决定派儿子黑木抢在太子之前找到她们，一举灭口。
笑笑、秋月、百灵和十三姨一路坎坷逃到扬州城，十三姨取出自己做歌*时攒下的私房钱和笑笑等开了一家“姐妹客栈”以维持生计。不久，乔装打扮的龙儿和黑木也先后找到了“姐妹客栈”，并成为客栈的伙计——“小龙”和“大黑”，
小石头也因经常要通风报信，成为客栈的常客。
“姐妹客栈”渐渐好名远扬，可却麻烦不断。巡抚大人的公子王俊才住进店内，原来他是为追寻逃婚的小妾冷秋月而来，并拿出秋月的卖身契相要挟。为帮助秋月逃脱魔爪，众人决定利用王俊才好色的弱点，让笑笑主动向王俊才示好，王俊才果然上当，乖乖地交出卖身契，笑笑见计划得逞，当即撕碎卖身契，溜之大吉。王俊才因此怀恨在心，他收买了赶考书生李长安，伺机报复。
“姐妹客栈”众人相处久了，率真的笑笑对智勇双全的小龙渐生好感，而小龙却暗恋娴雅温柔的秋月，于是笑笑只得求教于十三姨，十三姨自诩男人煞星，并答应向笑笑演示如何在十天内搏得一个男人的欢心，试验的对象恰恰是李长安。果然十天后，被征服的不是李长安，而是十三姨自己，她决定卖掉“姐妹客栈”和李长安私奔，最后当她得知一切都是阴谋时，终因不堪重击而大病一场丧失了记忆。为帮助十三姨恢复记忆，笑笑连夜飞鸿唤来父亲柳员外，无奈之中年迈的柳员外不得不对十三姨展开新一轮的追求。
之后，“姐妹客栈”又发生了许多有趣而惊险的故事：百灵的身世之谜，笑笑捉鬼，十三姨智斗赌王，秋月和洋人的友情，百灵忽然丧失味觉……。在患难与共中，大黑和小龙成为生死之交，秋月和大黑的爱情也日趋明朗，小龙终于发现一直暗恋自己的笑笑才是最适合自己的女孩，十三姨虽然没有恢复记忆，却被柳员外的真诚打动，第二次爱上了柳员外，而百灵也和“包打听”小石头成了一对。与此同时，赵王爷为铲除心头大患，早日谋反成功，借扬州大旱之际，设下“求雨”圈套，准备在除掉四女同时，一举谋反，却不料最后关头天降大雨，笑笑等人险渡难关，赵王爷计划全盘落空。而这时，小龙和大黑的身份也被揭穿，笑笑等终于弄清整个事件的来龙去脉。在黑木的妹妹黑珍珠的最后一次暗杀计划也告失败后，宋国与黑齿国约定的期限也终于到了。
比赛中，秋月、百灵、十三姨和柳笑笑齐心合力，凭借高超的技艺出奇制胜，经过一番智慧与意志的较量最终战胜了对手。赵王爷眼看败局已定，正欲刺杀龙儿，这时，昏迷多日的当朝皇帝突然出现在赛场，原来他早就觉察出赵亲王的不轨之心，佯装病重欲擒故纵，也借此考验太子龙儿的能力，终于，赵亲王等一批*臣贪官受到了应有的惩罚。宋国与黑齿国也重修旧好。
不久以后，小龙和大黑不约而同向父亲提出放弃太子的身份，做一个普通百姓，因为两人深刻体会到在“姐妹客栈”得到的幸福要远胜于宫廷的浮华。至此，有情人终成眷属，而“姐妹客栈”的故事也成为了江湖上广为流传的佳话。
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